重生之液相色譜反相柱
新的色譜柱總是很貴,科研院所和規(guī)模較小的公司財大氣粗的少有,給每一種方法配一根新的色譜柱只是一個美好的愿望。我相信大部分同學(xué)或者同行的實(shí)驗(yàn)室里總會有那么一批用過的色譜柱。當(dāng)我們需要開發(fā)新的方法時老板總會從抽屜或者其他角落里翻出一根陳年老柱,神秘兮兮的告訴你這根色譜柱的悠久歷史,希望你能用這根柱子再創(chuàng)輝煌。這個時候相信很多同學(xué)心里已是萬“馬”奔騰。
不過,seriously,色譜柱值不值得再生,究竟該如何再生,卻一直是一個江湖傳說。筆者今日也遇上這種問題,也深入的做了一些調(diào)查。發(fā)現(xiàn)事情不是那么簡單?偟膩碚f,我們首先要考慮的是值不值得在一根老柱子上浪費(fèi)時間,當(dāng)然,對于那些老板抱著死馬當(dāng)活馬醫(yī)的心思的同學(xué),這個是不適用的,反正,作為一個行業(yè)小白,我們的時間在老板眼里就是用來浪費(fèi)的。
一般來說,對于C18柱子其壽命大概在2000次左右,不過根據(jù)實(shí)際情況,可能會上下浮動不少。如果舊柱子的使用次數(shù)跟預(yù)期壽命相差不大,就沒必要浪費(fèi)時間在上面了,一方面是投入產(chǎn)出比太低,另一方面對于一個全新的方法開發(fā)來說,舊柱子會有各種各樣的問題,比如基線不穩(wěn),各種鬼峰,分辨率太低等。還不如說服老板買一根新的柱子。
對于科研人員來說,有時候我們進(jìn)幾百次樣就可以完成一個項(xiàng)目,如果這根柱子就此被拋棄,還是覺得挺可惜的。大部分老板會暫時把它打入冷宮,等待在對的時間遇見對的你。對于這種柱子,花點(diǎn)時間在上面還是很有價值的。還有一些柱子是由于使用不當(dāng)造成性能下降,我很也會考慮用一些方法讓它重生。
柱子長時間不用或者操作不當(dāng)會導(dǎo)致一些問題,比如,固定相徹底變干燥,柱子入口篩板被顆粒物堵塞,固定相表面鍵合官能團(tuán)流失,難溶解物質(zhì)在柱子里的堆積等。針對不同的問題,我們有不同的解決方法。比如保護(hù)液蒸發(fā),固定相徹底變干,這并不是很可怕的事情。用有機(jī)相慢慢沖洗就可以恢復(fù)。
柱子進(jìn)口篩板堵塞的問題可以通過反沖解決。在日常使用中也要注意預(yù)防這個問題,通過保護(hù)柱和樣品過濾可以將絕大多數(shù)顆粒物移除。
固定相表面鍵合的官能團(tuán)會隨著使用時間的增長而緩慢流失,這也是為什么柱子使用一段時間之后柱效會下降。這是正常的,無須擔(dān)心。需要我們注意的是一些極端條件會加速這個過程,比如流動相的pH超出柱子的耐受范圍。如果出現(xiàn)非正常的流失現(xiàn)象,柱子基本上無法修復(fù)。
對于沉積在柱子中的難溶解物質(zhì),還是可以通過一定的程序洗脫的。柱子的再生,也往往是指這個過程。對于大多數(shù)的問題,可以依次用乙腈或者甲醇,二氯甲烷,然后回到乙腈或者甲醇,最后用流動相反向沖洗柱子。沖洗的溶劑種類,時間長短和順序可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整,以下是一個實(shí)際例子:
100% 甲醇
100% 乙腈
75%乙腈+25%異丙醇
100%異丙醇
100%二氯甲烷
100%正己烷
100%異丙醇
來源:分析化學(xué)
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